Media tanam yang siap pakai kemudian dimasukkan ke dalam kantong plastik berukuran 30 cm x 20 cm hingga setinggi 20 cm, lalu dipadatkan hingga menyerupai botol (baglog).
Pada ujung mulut botol diberi ring, kemudian mulut botol ditutup dengan kapas. Setelah itu, mulut baglog ditutup plastik agar air tidak masuk saat proses sterilisasi.
Proses sterilisasi baglog jamur dilakukan dengan cara dikukus pada suhu 95 sampai 120 derajat celcius selama enam hingga delapan jam. Sterilisasi yang merupakan proses penguapan ini dimaksudkan untuk membunuh mikroba liar yang ada.
Setelah proses sterilisasi selesai, maka baglog didiamkan di ruang inokulasi sampai suhu normal kembali. Ruang inokulasi harus dalam keadaan steril dan sirkulasi udara berjalan dengan baik.
Baca juga: Cara Budidaya Jamur Shiitake, Peluang Bisnis yang Menjanjikan
Tangan Anda dan bibir botol bibit juga harus disterilkan dengan menyemprotkan alkohol.
Inokulasi dilakukan dengan cara membuka tutup baglog di atas api spiritus, lalu bibit diambil dari botol dengan kawat yang telah dipanaskan agar steril. Kemudian bibit dimasukkan secara merata ke dalam mulut baglog yang telah diambil kapasnya.
Setelah proses inokulasi selesai, baglog diletakkan di dalam ruang inkubasi dengan suhu 28 sampai 35 derajat celcius, kelembapan 89 persen, dan pencahayaan lampu TL 60 watt. Lama masa inkubasi adalah empat hingga delapan minggu.
Pada saat itu, biasanya telah tumbuh miselium putih pada baglog.
Baca juga: Mengenal Jamur Kuping, Banyak Manfaatnya untuk Kesehatan
Setelah miselium tumbuh sekitar setengah bagian dari baglog maka baglog dapat dipindahkan ke rumah kumbung.